Місцевий мутагенез є безцінним інструментом для модифікувати гени та вивчати структурно-функціональні властивості білка, що базується на структурі, функції, каталітичному механізмі та каталітичних залишках ферментів. Сайт-спрямований мутагенез включає одиничні та комбіновані мутації.
Сайт-спрямований мутагенез (SDM) дозволяє точні зміни послідовності ДНК. Використовується для дослідження змін активності білка та введення корисних мутацій. Набори GenieClone сприяють ефективній множинній мутації в одній реакції. Проблеми включають дизайн праймера, якість шаблону та оптимізацію реакції.
Порівняно з непрямими методами виявлення мутагенезу, аналізи мутагенезу мають перевагу в тому, що вони більш специфічні, оскільки вони виявляти зміни в послідовності ДНК, а не зміни експресії генів, спричинені пошкодженням ДНК.
Ефективність мутагенезу >80% було стабільно досягнуто у випадку двох неспоріднених плазмід. Сайт-спрямований мутагенез шляхом унікальної елімінації сайтів рестрикції, запропонований Денгом і Ніколоффом, дозволяє проводити сайт-специфічний мутагенез плазмідної ДНК без будь-якої стадії субклонування (1).
Сайт-спрямований мутагенез (SDM) є методом для створюють специфічні цілеспрямовані зміни в дволанцюговій плазмідній ДНК. Існує багато причин для внесення певних змін ДНК (вставок, делецій і замін), зокрема: Вивчення змін активності білків, які відбуваються в результаті маніпуляцій з ДНК.
Недоліки. Кілька грунтовок на замовлення (мінімум 4 праймера для створення 1 мутації замість 2). Проводити кілька ПЛР-реакцій (але вони завершуються в 4 рази швидше). Етапи екстракції гелю та/або ПЛР-очищення необхідні для всіх етапів очищення.