Імморталізовані клітинні лінії — це клітини, модифіковані таким чином, що їх можна культивувати нескінченно [6]. Це досягається будь-яким виділення та культивування пухлинних клітин та їх культивування або шляхом введення безсмертного гена.
Методи генерації
- Виділення від природного раку. …
- Введення вірусного гена, який частково дерегулює клітинний цикл (наприклад, ген Е1 аденовірусу типу 5 був використаний для увічнення клітинної лінії HEK 293; вірус Епштейна-Барра може увічнити В-лімфоцити шляхом інфікування).
Увічнення шляхом генетичної модифікації Найпоширенішим способом увічнення клітин є генетично модифікувати їх, щоб уникнути старіння. Це можна зробити, інфікуючи клітини вірусами або вставляючи фрагменти ДНК, які містять гени, які роблять клітини безсмертними.
Щоб забезпечити створення стабільних клітинних ліній, клітинні культури оцінюються на основі таких параметрів, як аналіз середовища, гетерогенність білкової послідовності, профіль глікозилювання, стабільність клону, варіанти заряду та динаміка росту, серед інших.
Процес розвитку стабільних клітинних ліній часто починається з трансфекція вибраних клітин-господарів, як правило, клітин CHO або HEK 293, бажаними плазмідами. Після трансфекції дослідники перевіряють і кількісно визначають клони з високою експресією.
В даний час існує багато методів імморталізації клітин, включаючи введення в клітину вірусних онкогенів (Т-антиген SV40 (Simian Vacuolating virus), HPV16/18 (Human Papillomavirus) білки E6 і E7 та інші); введення гена TERT, який відповідає за кодування каталітичної субодиниці …