Середній час перебування електрона у збудженому стані перед випромінюванням фотона називається часом життя. Тривалість життя флуоресценції зазвичай коливається в порядку 10− 9 до 10− 7 [s]. Час життя τ дорівнює часу, після якого інтенсивність I падає до 1/e свого початкового значення I0.
Таблиця 1
| Клас флуорофорів | Діапазон тривалості флуоресценції, нс | посилання |
|---|---|---|
| Ендогенні флуорофори | 0,1 – 7 нс | Дивіться таблицю 4 |
| Органічні барвники | 0,1 – 20 нс, до 90 нс (пірени) | Див. таблицю 5 |
| Флуоресцентні білки | 0,1 – 4 нс | Див. таблицю 7 |
| Квантові точки | середній – 10-30 нс, до 500 нс | 1-3 |
Інтенсивність флуоресценції вказує скільки світла (фотонів) випромінюється. Це ступінь випромінювання, який залежить від концентрації збудженого флуорофора. Флуоресценція створюється шляхом поглинання енергії (світла) флуоресцентними молекулами, які називаються флуорофорами.
Тривалість життя флуоресценції визначається як час, який потрібен інтенсивності, щоб впасти до 1/e (=0,368) початкового значення (Малюнок 1а). Згасання флуоресценції найчастіше показано в логарифмічній шкалі, яка дає лінійну відповідь для одного експоненціального загасання (рис. 1b).
FLIM широко використовується в біомедична візуалізація, коли тканини та клітини фарбуються одним або кількома флуоресцентними барвниками. Тривалість флуоресценції барвників залежить від місцевого мікросередовища, і FLIM забезпечує додатковий вимір інформації про довкілля порівняно з іншими методами візуалізації, такими як широкопольна флуоресценція.
Згасання інтенсивності флуоресценції часто наносять на логарифмічну шкалу інтенсивності як log(I(t)) від часу (t), як показано на малюнку 2b, який є прямою лінією для одного спаду протягом життя. Тривалість життя флуоресценції можна оцінити за виміряним розпадом, використовуючи час, потрібний інтенсивності для зменшення до 1/e.